Применение ферментов в качестве химических реактивов составляет особую область аналитической и препаративной биохимии.
В качестве примеров можно привести определение кокарбок-силазы в крови при помощи протеиназы Asp. niger, расщепляющей ее с выделением тиамина. По количеству свободного тиамина рассчитывают количество фермента.
Определение галактозы производят, используя галактозоокси-дазу гриба Polysporus ciracinatus. Фермент окисляет галактозу, переводя ее в соответствующий лактон с одновременным образованием пероксида водорода. При добавлении пероксидазы и орто-дианизидина появляется синяя окраска колириметрируемо-го раствора.
Определение оротовой кислоты можно проводить с соответствующей дегидрогеназой оротовой кислоты из Clostridium oro-ticum. Фермент катализирует восстановление оротовой кислоты НАДН2 с образованием дигидрооротата и НАД.
Бактериальная гиалуронидаза расщепляет гиалуроновую кислоту количественно с образованием ненасыщенного дисахарида. При этом образуются N-ацетилглюкозаминовые группы, дающие при нагревании в щелочи с пара-диметиламинобензальдегидом красную окраску (важно для колориметрирования).
Бактериальные и грибные протеиназы используются для расщепления белков, причем расщепление может быть фрагментарным. Например, субтилизин при коротком воздействии на рибо-нуклеазу расщепляет только одну пептидную связь этого белка. Карбоксидопептидаза дрожжей постепенно расщепляет белки, отделяя одну за другой аминокислоты с карбоксильного или аминного конца.
Определение L-аминокислот (L-лизин, L-аргинин, L-орнитин, L-тирозин и др.) можно проводить с помощью специфических декарбоксилаз аминокислот. Ферменты синтезируются некоторыми бактериями (например, CI. welchii, CI. septica) и эффективны при низком значении рН. Образовавшаяся при реакции углекислота может быть измерена количественно.
Определение глутамина и аспарагина проводится путем их дезаминирования специфическими дезаминадами Pseudomonas sp. Освобождающийся аммиак определяют по цветной реакции с фенолятом в присутствии нитропруссида.
Весьма перспективны такие ферменты микроорганизмов, как холестериноксидаза для определения холестерина в крови, алко-гольоксидаза для обнаружения спирта и др. Ферменты используют также для изучения первичной структуры высокомолекулярных соединений: нуклеиновых кислот, белков, полисахаридов.