В последние годы большое внимание уделяется влиянию скорости замораживания и оттаивания на жизнеспособность клеток. Различают скорость охлаждения до точки замерзания суспензии и скорость охлаждения от точки замерзания суспензии.
Для различных микроорганизмов существует оптимальная скорость охлаждения. Например, у ряда бактерия (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Azotobacier chroococcum и некоторых других) оптимум выживаемости наблюдали при скорости охлаждения 5—40°С/мин, у дрожжей — 7°С/мин. Грамположи-тельные (Lactobacillus easel, Staphylococcus aureus) и грамот-рицательные бактерии (Е. coll, P. aeruginosa, P. fluorescens,Serratia marcescens) не повреждались при очень быстром замораживании (105 градус/мин) в атмосфере жидкого и твердого азота на мембранных фильтрах. Не было отмечено различий и в скорости их роста, и в морфологии колоний после быстрого оттаивания.
Лучшие результаты выживаемости получены при двухэтап-ном режиме охлаждения: сначала с медленной скоростью охлаждения (1 °С/мин) до — 30 °С и затем быстрым охлаждением со скоростью от 15—30°С/мин до —150° С. Ампулы хранят в жидком азоте при —196 °С.
Следует подчеркнуть, что необходимо измерять скорость охлаждения образца, а не охлаждающей бани. Скорость оттаивания образца должна быть быстрой. Особенно это имеет значение в случае быстрого и ультрабыстрого охлаждения для предупреждения повреждений, вызываемых рекристаллизацией льда. Обычно образец оттаивают в водяной бане при +30, +45 °С.
Преимущества метода криогенного хранения состоят в следующем: малой вероятности заражения культуры, сохранении стабильными свойств микроорганизмов, затрате небольшого времени и небольшого количества материалов при подготовке культуры к хранению. Клетки можно легко извлечь из рефрижератора и использовать без пересевов в качестве прямого ино-кулята.
Трудности метода: требует специально оборудованного рефрижератора и регулярного контроля его работы. Необходимы меры предосторожности при проверке герметичности стеклянных ампул для предупреждения взрыва.